Elektroforéza na polyakrylamidovom géli
Gélová elektroforéza je základná technika v laboratóriách naprieč biologickými disciplínami, ktorá umožňuje separáciu makromolekúl, ako sú DNA, RNA a proteíny.Rôzne separačné médiá a mechanizmy umožňujú efektívnejšiu separáciu podskupín týchto molekúl využitím ich fyzikálnych vlastností.Najmä pre proteíny je často preferovanou technikou elektroforéza na polyakrylamidovom géli (PAGE).
PAGE je technika, ktorá oddeľuje makromolekuly, ako sú proteíny, na základe ich elektroforetickej mobility, to znamená schopnosti analytov pohybovať sa smerom k elektróde s opačným nábojom.V PAGE je to určené nábojom, veľkosťou (molekulovou hmotnosťou) a tvarom molekuly.Analyty sa pohybujú cez póry vytvorené v polyakrylamidovom géli.Na rozdiel od DNA a RNA sa bielkoviny líšia v náboji podľa začlenených aminokyselín, čo môže ovplyvniť ich priebeh.Aminokyselinové reťazce môžu tiež tvoriť sekundárne štruktúry, ktoré ovplyvňujú ich zdanlivú veľkosť a následne to, ako sa dokážu pohybovať cez póry.Preto môže byť niekedy žiaduce denaturovať proteíny pred elektroforézou na ich linearizáciu, ak je potrebný presnejší odhad veľkosti.
STRÁNKA SDS
Elektroforéza na polyakrylamidovom géli s dodecylsulfátom sodným je technika používaná na oddelenie proteínových molekúl s hmotnosťou 5 až 250 kDa.Proteíny sú separované výlučne na základe ich molekulovej hmotnosti.Pri príprave gélov sa pridáva dodecylsulfát sodný, aniónová povrchovo aktívna látka, ktorá maskuje vnútorné náboje proteínových vzoriek a dáva im podobný pomer náboja k hmotnosti.Jednoducho povedané, denaturuje proteíny a dáva im negatívny náboj.
Natívna PAGE
Natívna PAGE je technika, ktorá využíva na separáciu proteínov nedenaturované gély.Na rozdiel od SDS PAGE sa pri príprave gélov nepridáva žiadne denaturačné činidlo.Výsledkom je, že separácia proteínov prebieha na základe náboja a veľkosti proteínov.Pri tejto technike sú konformácia, skladanie a aminokyselinové reťazce proteínov faktormi, od ktorých závisí separácia.Proteíny sa pri tomto procese nepoškodia a môžu sa získať späť po dokončení separácie.
Ako funguje elektroforéza na polyakrylamidovom géli (PAGE)?
Základným princípom PAGE je separácia analytov ich prechodom cez póry polyakrylamidového gélu pomocou elektrického prúdu.Aby sa to dosiahlo, zmes akrylamidu a bisakrylamidu sa polymerizuje (polyakrylamid) pridaním persíranu amónneho (APS).Reakcia, ktorá je katalyzovaná tetrametyletyléndiamínom (TEMED), vytvára sieťovú štruktúru s pórmi, cez ktoré sa môžu analyty pohybovať (obrázok 2).Čím vyššie je percento celkového akrylamidu obsiahnutého v géli, tým menšia je veľkosť pórov, a teda menšie proteíny, ktoré budú schopné prejsť.Pomer akrylamidu k bisakrylamidu tiež ovplyvní veľkosť pórov, ale často zostáva konštantná.Menšie veľkosti pórov tiež znižujú rýchlosť, ktorou sa malé proteíny môžu pohybovať cez gél, čím sa zlepšuje ich rozlíšenie a zabraňuje sa ich rýchlemu odtekaniu do pufra pri aplikácii prúdu.
Zariadenie na elektroforézu v polyakrylamidovom géli
Bunka na gélovú elektroforézu (zásobník/komora)
Gélová nádrž pre elektroforézu na polyakrylamidovom géli (PAGE) sa líši od nádrže s agarózovým gélom.Nádrž na agarózový gél je horizontálna, zatiaľ čo nádrž PAGE je vertikálna.Vertikálnou elektroforézou (nádrž/komora) sa tenký gél (normálne 1,0 mm alebo 1,5 mm) naleje medzi dve sklenené platne a umiestni sa tak, že spodná časť gélu je ponorená v pufri v jednej komore a vrchná časť je ponorená v pufri v inej komore.Keď sa aplikuje prúd, malé množstvo pufra migruje cez gél z hornej komory do spodnej komory.So silnými svorkami, ktoré zaručujú, že zostava zostane vo vzpriamenej polohe, zariadenie uľahčuje rýchle gélové chody s rovnomerným chladením, výsledkom čoho sú zreteľné pásy.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) vyrába rad veľkostí buniek na elektroforézu s polyakrylamidovým gélom (nádrže/komory).Modely DYCZ-20C a DYCZ-20G sú vertikálne elektroforézne bunky (nádrže/komory) na analýzu sekvenovania DNA.Niektoré z vertikálnych elektroforéz (nádrže/komory) sú kompatibilné s blotovacím systémom, napríklad model DYCZ-24DN, DYCZ-25D a DYCZ-25E sú kompatibilné so systémom Western blotting model DYCZ-40D, DYCZ-40G a DYCZ-40F, ktoré sa používajú na prenos molekuly proteínu z gélu na membránu.Po elektroforéze SDS-PAGE je Western blotting technika na detekciu špecifického proteínu v proteínovej zmesi.Tieto blotovacie systémy si môžete vybrať podľa experimentálnych požiadaviek.
Elektroforéza napájanie
Na zabezpečenie elektrickej energie na chod gélu budete potrebovať napájanie elektroforézy.V Liuyi Biotechnology poskytujeme rad napájacích zdrojov pre elektroforézu pre všetky aplikácie.Model DYY-12 a DYY-12C s vysokým stabilným napätím a prúdom dokáže splniť požiadavky na vysokonapäťovú elektroforézu.Má funkciu stojana, časovania, VH a postupnú aplikáciu.Sú ideálne pre IEF a DNA sekvenčnú elektroforézu.Pre všeobecnú aplikáciu elektroforézy proteínov a DNA máme model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 atď., čo sú tiež horúce predajné napájacie zdroje s elektroforéznymi článkami (nádrže/komory).Môžu byť použité pre aplikácie stredno- a nízkonapäťovej elektroforézy, ako sú školské laboratóriá, nemocničné laboratóriá atď.Ďalšie modely napájacích zdrojov nájdete na našej webovej stránke.
Značka Liuyi má v Číne viac ako 50-ročnú históriu a spoločnosť môže poskytovať stabilné a vysokokvalitné produkty po celom svete.Vďaka dlhoročnému vývoju si zaslúži vašu voľbu!
Pre viac informácií o nás nás prosím kontaktujte emailom[e-mail chránený] or [e-mail chránený].
Referencie pre Čo je elektroforéza na polyakrylamidovom géli?
1. Karen Steward PhD Polyakrylamidová gélová elektroforéza, ako to funguje, varianty techniky a jej aplikácie
Čas odoslania: 23. mája 2022