Comet Assay (jednobunková gélová elektroforéza, SCGE) je citlivá a rýchla technika primárne používaná na detekciu poškodenia a opravy DNA v jednotlivých bunkách. Názov „Comet Assay“ pochádza z charakteristického tvaru podobného kométe, ktorý sa objavuje vo výsledkoch: jadro bunky tvorí „hlavu“, zatiaľ čo poškodené fragmenty DNA migrujú a vytvárajú „chvost“ pripomínajúci kométu.
Princíp
Princíp Comet Assay je založený na migrácii fragmentov DNA v elektrickom poli. Neporušená DNA zostáva v bunkovom jadre, zatiaľ čo poškodená alebo fragmentovaná DNA migruje smerom k anóde a vytvára „chvost“ kométy. Dĺžka a intenzita chvosta sú priamo úmerné rozsahu poškodenia DNA.
Postup
- Príprava buniek: Bunky, ktoré sa majú testovať, sa zmiešajú s agarózou s nízkou teplotou topenia a rozložia sa na mikroskopické sklíčka, aby sa vytvorila jednotná vrstva.
- Bunková lýza: Sklíčka sa ponoria do lyzačného roztoku, aby sa odstránila bunková membrána a jadrová membrána, čím sa odkryje DNA.
- Elektroforéza: Sklíčka sa umiestnia do elektroforetickej komory v alkalických alebo neutrálnych podmienkach. Poškodené fragmenty DNA migrujú smerom k pozitívnej elektróde pod vplyvom elektrického poľa.
- Farbenie: Po elektroforéze sa sklíčka zafarbia fluorescenčným farbivom (napr. etídium bromid) na vizualizáciu DNA.
- Mikroskopická analýza: Pomocou fluorescenčného mikroskopu alebo špecializovaného softvéru sa analyzujú tvary komét a merajú sa parametre, ako je dĺžka chvosta a intenzita.
Obrázok z biorenderu
Analýza dát
Výsledky z Comet Assay sú hodnotené na základe niekoľkých kľúčových parametrov:
- Dĺžka chvosta: Predstavuje vzdialenosť, ktorú DNA migruje, čo naznačuje rozsah poškodenia DNA.
- Obsah DNA chvosta: Percento DNA, ktoré migruje do chvosta, často používané ako kvantitatívna miera poškodenia DNA.
- Olive Tail Moment (OTM): Kombinuje dĺžku chvosta a obsah DNA chvosta, čím poskytuje komplexnejšiu mieru poškodenia DNA.
Aplikácie
- Štúdie genotoxicity: Comet Assay sa široko používa na hodnotenie účinkov chemikálií, liekov a žiarenia na bunkovú DNA, čo z neho robí kľúčový nástroj na testovanie genotoxicity.
- Environmentálna toxikológia: Pomáha pri analýze vplyvu látok znečisťujúcich životné prostredie na DNA organizmov a poskytuje pohľad na bezpečnosť ekosystémov.
- Lekársky a klinický výskum: Comet Assay sa používa pri štúdiu mechanizmov opravy DNA, rakoviny a iných chorôb súvisiacich s DNA. Hodnotí tiež vplyv liečby rakoviny, ako je rádioterapia a chemoterapia, na DNA.
- Veda o potravinách a poľnohospodárstve: Používa sa na hodnotenie bezpečnosti pesticídov, potravinárskych prísad a iných látok a na štúdium ich toxických účinkov na zvieracích modeloch.
Výhody
- Vysoká citlivosť: Schopný odhaliť nízke úrovne poškodenia DNA.
- Jednoduchá obsluha: Technika je priamočiara, vďaka čomu je vhodná na vysokovýkonný skríning.
- Široká aplikácia: Môže sa aplikovať na rôzne typy buniek vrátane živočíšnych a rastlinných buniek.
- Kvantifikačné výzvy: Pri poskytovaní kvalitatívnych údajov o poškodení DNA sa kvantitatívna analýza vo veľkej miere opiera o softvér a techniky analýzy obrazu.
- Experimentálne podmienky: Výsledky môžu byť ovplyvnené faktormi, ako je čas elektroforézy a pH, čo si vyžaduje starostlivú kontrolu experimentálnych podmienok.
Obmedzenia
Comet Assay je neoceniteľným nástrojom v biomedicínskom výskume, environmentálnych vedách a vývoji liekov vďaka svojej flexibilite a vysokej citlivosti pri zisťovaní poškodenia a opravy DNA. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)ponúka horizontálnu elektroforéznu komoru pre kométový test. Vitajte v kontakte s nami, aby ste diskutovali oComet Assayprotokol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) sa špecializuje na výrobu elektroforéznych prístrojov už viac ako 50 rokov s vlastným profesionálnym technickým tímom a R&D centrom. Máme spoľahlivú a kompletnú výrobnú linku od návrhu po kontrolu a sklad, ako aj marketingovú podporu. Naše hlavné produkty sú elektroforéza Cell (nádrž/komora), elektroforézny zdroj napájania, Blue LED Transiluminator, UV Transiluminator, Gel Image & Analysis System atď. Dodávame aj laboratórne prístroje ako PCR prístroj, vortexový mixér a odstredivka pre laboratórium.
Ak máte nejaký plán nákupu pre naše produkty, neváhajte nás kontaktovať. Môžete nám poslať správu na email[chránený e-mailom]alebo[chránený e-mailom], alebo nám zavolajte na číslo +86 15810650221 alebo pridajte Whatsapp +86 15810650221, alebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte QR kód a pridajte ho na Whatsapp alebo WeChat.
Čas odoslania: 20. septembra 2024