Úvod
Gélová elektroforéza je základná technika v molekulárnej biológii, ktorá sa široko používa na separáciu proteínov, nukleových kyselín a iných makromolekúl. Správna kontrola objemu vzorky, napätia a času elektroforézy je rozhodujúca pre dosiahnutie presných a reprodukovateľných výsledkov.Náš kolega z laboratória ponúkaosvedčené postupy riadenia týchto parametrov počas gélovej elektroforézy SDS-PAGE.
Produkty biotechnologickej gélovej elektroforézy v Pekingu Liuyi
Objem vzorky: Zabezpečenie konzistentnosti
Pri vykonávaní elektroforézy SDS-PAGE je objem vzorky kľúčovým faktorom, ktorý môže výrazne ovplyvniť rozlíšenie vašich výsledkov. Všeobecne sa odporúča naniesť 10 µl celkového proteínu na jamku. Aby sa zabezpečila konzistencia a zabránilo sa difúzii vzorky medzi susednými jamkami, je dôležité vložiť rovnaký objem 1x nanášacieho pufra do všetkých prázdnych jamiek. Toto opatrenie pomáha predchádzať šíreniu vzoriek do susedných pruhov, ku ktorému môže dôjsť, ak studňa zostane prázdna.
Pred vložením vzoriek vždy začnite pridaním markera molekulovej hmotnosti do jednej jamky. To umožňuje ľahkú identifikáciu veľkosti proteínov po elektroforéze.
Ovládanie napätia: Vyvažovanie rýchlosti a rozlíšenia
Napätie aplikované počas elektroforézy priamo ovplyvňuje rýchlosť, ktorou vzorky migrujú cez gél, ako aj rozlíšenie separácie. Pri SDS-PAGE je vhodné začať s nízkym napätím okolo 80V. Toto počiatočné nízke napätie umožňuje vzorkám migrovať pomaly a rovnomerne a pri vstupe do separačného gélu ich koncentrovať v ostrom páse.
Keď vzorky úplne vstúpia do separačného gélu, napätie sa môže zvýšiť na 120 V. Toto vyššie napätie urýchľuje migráciu a zabezpečuje, že proteíny sú efektívne oddelené podľa ich molekulovej hmotnosti. Je nevyhnutné monitorovať postup farbiva brómfenolovej modrej, ktorý indikuje ukončenie elektroforézy. Pre gély s koncentráciou 10-12% zvyčajne postačuje 80-90 minút; pri 15 % géloch však možno budete musieť trochu predĺžiť dobu spracovania.
Time management: Vedieť, kedy prestať
Načasovanie je ďalším kritickým faktorom pri gélovej elektroforéze. Spustenie gélu príliš dlho alebo príliš krátko môže viesť k suboptimálnej separácii. Užitočným indikátorom je migrácia farbiva brómfenolovej modrej: keď dosiahne dno gélu, je zvyčajne čas zastaviť proces. Pre štandardné gély, ako je 10 až 12 %, je zvyčajne postačujúce trvanie elektroforézy približne 80 až 90 minút. V prípade gélov s vyšším percentom, napríklad 15 %, by sa mala doba spracovania predĺžiť, aby sa zabezpečila úplná separácia proteínov.
Správa vyrovnávacej pamäte: Opätovné použitie a príprava vyrovnávacej pamäte
Elektroforézny pufor je možné znovu použiť 1-2 krát v závislosti od špecifických podmienok vášho laboratória. Pre optimálne výsledky sa však odporúča pripraviť čerstvý 10x tlmivý roztok a tesne pred použitím ho zriediť. To zaisťuje, že si pufor zachová svoju účinnosť, čo vedie k spoľahlivejším výsledkom elektroforézy.
Produkty biotechnologickej gélovej elektroforézy v Pekingu Liuyi
Starostlivým riadením objemu vzorky, napätia a času elektroforézy môžete výrazne zlepšiť presnosť a reprodukovateľnosť výsledkov gélovej elektroforézy. Implementácia týchto osvedčených postupov vo vašej laboratórnej práci vám pomôže dosiahnuť jasnejšie a zreteľnejšie pásma, čo povedie k lepším údajom pre následnú analýzu.
Ak máte viac dobrých metód na optimalizáciu experimentu s gélovou elektroforézou, vitajte a diskutujte s nami!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) sa špecializuje na výrobu elektroforéznych prístrojov už viac ako 50 rokov s vlastným profesionálnym technickým tímom a R&D centrom. Máme spoľahlivú a kompletnú výrobnú linku od návrhu po kontrolu a sklad, ako aj marketingovú podporu. Naše hlavné produkty sú elektroforéza Cell (nádrž/komora), elektroforézny zdroj napájania, Blue LED Transiluminator, UV Transiluminator, Gel Image & Analysis System atď. Dodávame aj laboratórne prístroje ako PCR prístroj, vortexový mixér a odstredivka pre laboratórium.
Ak máte nejaký plán nákupu pre naše produkty, neváhajte nás kontaktovať. Môžete nám poslať správu na email[chránený e-mailom]alebo[chránený e-mailom], alebo nám zavolajte na číslo +86 15810650221 alebo pridajte Whatsapp +86 15810650221, alebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte QR kód a pridajte ho na Whatsapp alebo WeChat.
Čas odoslania: 20. augusta 2024