Princíp
Elektroforéza na filme z acetátu celulózy je metóda elektroforézy s použitím filmu z acetátu celulózy ako nosiča. Jav, pri ktorom sa nabité častice pôsobením elektrického poľa pohybujú smerom k opačnej elektróde, sa nazýva elektroforéza. Pretože každý proteín má špecifický izoelektrický bod, ak sa proteín umiestni do roztoku s pH nižším, ako je jeho izoelektrický bod, proteín bude pozitívne nabitý a bude sa pohybovať smerom k negatívnej elektróde. Naopak, posúva sa do kladného pólu. Pretože rýchlosť proteínových molekúl pohybujúcich sa v elektrickom poli súvisí s ich nábojom, tvarom a veľkosťou molekúl, môžu byť rôzne proteíny separované elektroforézou. Sérum obsahuje rôzne proteíny, z ktorých všetky majú izoelektrické body pri pH 7,5 alebo menej. Keď sa sérum umiestni do tlmivého roztoku s pH 8,6 na uskutočnenie elektroforézy, všetky sérové proteíny sú negatívne nabité a budú sa pohybovať smerom k pozitívnej strane v elektrickom poli. Pretože rôzne sérové proteíny majú rôzne náboje pri rovnakom pH, molekulárne častice majú rôznu veľkosť, a teda aj rýchlosť migrácie je odlišná a sú oddelené elektroforézou. Izoelektrické body a molekulové hmotnosti sérových proteínov sú uvedené v tabuľke nižšie:
| Proteín | Izoelektrické body (PI) | Molekulová hmotnosť |
| albumín | 4,88 | 69 000 |
| a1-gloulín | 5,00 | 200 000 |
| α2-gloulín | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulín | 5.12 | 9 000 až 150 000 |
| y-gloulín | 6,85 až 7,50 | 156 000 až 300 000 |
Experimentom je oddelenie rôznych proteínov v krvnom sére s membránou z acetátu celulózy (skr. CAM) ako podporným médiom. CAM je druh penového loosuefilm s dobrou rovnomernosťou a hrúbka je 0,1 mm až 1,5 mm, čo má určitú absorpciu vody.
Materiály, nástroje a činidlá pre CAM elektroforézu
vzorky:zdravé ľudské krvné sérum
Nástroj:napájací zdroj DYY-6C, elektroforéza nádrž DYCP-38C, vynikajúce nakladanie vzoriek WD-9404
Činidlá
1) membrána z acetátu celulózy 7 x 9 cm
2) PH 8,6 barbitolový tlmivý roztok (iónová sila 0,05-0,09, to je čas 0,06 tid.): vezmite 1,84 g kyseliny dietylbarbiturovej a potom vezmite 1,03 g dietylpentobarbitalu sodného, pridajte trochu destilovanej vody na zahriatie, aby sa rozpustila, a do 1000 ml;
3) Škvrna: Ponceau S 0,2 g, trichlóroctová 3 g, pridajte 100 ml destilovanej vody;
4) TBS/T alebo PBS/T: 45 ml 95 % etanolu, 5 ml ľadovej kyseliny octovej, pridať 50 ml destilovanej vody;
5) Čistiaci roztok: 70 ml bezvodého etanolu, 30 ml ľadovej kyseliny octovej.
Experiment Method
1) Pripravte membránu: Ponorte membránu do tlmivého roztoku barbitolu na 30 minút až 8 hodín a vyberte ju, extra roztok odstráňte savým papierom.
2) Vkladanie vzoriek: Rozlišujte drsnú a hladkú stranu membrány a označte čiaru vo vzdialenosti 1,5 cm od horného konca na drsnej strane. Vložte vzorky pomocou špičkového nástroja na vkladanie vzoriek na hrubú stranu. Poznámka: Vzorky by sa mali vkladať na drsnú stranu membrány. Po úplnom preniknutí vzoriek séra do membrány otočte membránu, položte drsnú stranu (so vzorkami) lícom nadol k nádrži a koniec so vzorkami vložte do negatívnej elektródy.
3) Elektroforéza: Zapnite napájanie, 0,4～0,6m A/cm membrána, doba chodu je 30-45 min. Po vykonaní elektroforézy vypnite napájanie.
4) Zafarbenie a čistenie: Vyberte membránu z nádrže a ponorte juit do roztoku farbiva po dobu 5 minút a potom ho čistite v čistiacom roztoku znova a znova 3-4 krát, kým nebude farba pozadia číra. Sérové proteíny by mali byť zobrazené na pásoch a normálne je ich päť zón, od horného konca označenej čiary, albumín, α1-gloulín, α2-gloulín, β-gloulín, γ-gloulín.
5) Konzervácia: vložte suchú elektroforézukapelav čistiacom roztoku na 10-15 minút a potom ho vyberte a nalepte na čisté sklo, po zaschnutí sa z neho stane priehľadný filmkapela.
ExperimentujteVýsledok
Separačný efekt vzoriek séra je dobrý a nedochádza k žiadnemu javu zužovania pásov. Opakovateľnosť výsledkov sa líši v závislosti od testovacích postupov a metód experimentátora a opakovateľnosť je vysoká.
Záver
Systém rýchlej detekcie klinickej elektroforézy (Nádrž na elektroforézuDYCP-38C,napájací zdrojDYY-6C a vynikajúce nakladanie vzoriek WD-9404) vyrábané našimispoločnosť Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdspĺňa experimentálne požiadavky,avýsledky sú reprodukovateľné, jednoduché a rýchle, vhodné prevyučovanievýskumu.
Peking LiuyiBiotechnology Co., Ltd sa špecializuje na výrobu produktov elektroforézy pre priemysel biologických vied, ktorýmá viac ako 50-ročnú históriu v Číne a spoločnosť môže poskytovať stabilné a vysokokvalitné produkty po celom svete. Počas rokov vývoja si zaslúži vašu voľbu!
Teraz hľadáme partnerov, OEM elektroforézna nádrž aj distribútori sú vítaní.
Pre viac informácií o nás nás prosím kontaktujte emailom[chránený e-mailom]alebo[chránený e-mailom].
Čas odoslania: 14. novembra 2022