Príprava vzorky aNačítava sa
Vzhľadom na použitie kontinuálneho pufrovacieho systému bez stohovacieho gélu vo väčšine prípadov by vzorky mali mať vhodnú koncentráciu a malý objem. Použite apipetapomaly pridávať vzorku s 5-10 μg na jamku, aby sa predišlo výraznému zníženiu rozlíšenia. Kedynačítavanie vzorky, napájanie musí byť vypnuté. Vzorka by mala obsahovať indikátorové farbivo (0,025 % brómfenolovej modrej alebo oranžovej) a sacharózu (10 – 15 %) alebo glycerol (5 – 10 %), aby sa zvýšila jej hustota, zahustila sa vzorka a zabránilo sa difúzii. Niekedy však sacharóza alebo glycerol môžu spôsobiť vo výsledkoch elektroforézy pásy v tvare písmena U, čomu sa možno vyhnúť použitím 2,5 % Ficollu (polyvinylpyrolidónu).
Elektroforéza
Napätie pre elektroforézu je 5-15 V/cm, všeobecne okolo 10 V/cm. Na separáciu veľkých molekúl by malo byť napätie nižšie, zvyčajne nepresahujúce 5 V/cm.
Farbenie
Fluorescenčné farbivo etídium bromid (EB) sa bežne používa na farbenie na pozorovanie pásov DNA v agarózovom géli. EB sa môže vložiť medzi páry báz molekúl DNA, čo spôsobí, že sa EB naviaže na DNA. Absorpcia 260 nm ultrafialového svetla DNA sa prenesie do EB a naviazaný EB vyžaruje fluorescenciu pri 590 nm v červeno-oranžovej oblasti spektra viditeľného svetla. Farbenie gélu v 1 mmol/l roztoku MgSO4 počas 1 hodiny môže znížiť fluorescenciu pozadia spôsobenú nenaviazaným EB, čím sa uľahčí detekcia malých množstiev DNA.
EB farbivo má niekoľko výhod: ľahko sa používa, nerozbíja nukleové kyseliny, má vysokú citlivosť a môže farbiť DNA aj RNA. EB možno kedykoľvek pridať do vzorky a sledovať pomocou UV absorpcie. Po zafarbení možno EB odstrániť extrakciou n-butanolom.
EB farbivo je však silný mutagén a počas manipulácie je potrebné dodržiavať bezpečnostné opatrenia, ako je nosenie polyetylénových rukavíc. Akridínová oranž je tiež bežne používané farbivo, pretože dokáže rozlíšiť jednovláknové a dvojvláknové nukleové kyseliny (DNA, RNA). Vykazuje zelenú fluorescenciu (530 nm) pre dvojvláknové nukleové kyseliny a červenú fluorescenciu (640 nm) pre jednovláknové nukleové kyseliny. Okrem toho sa na farbenie môžu použiť iné farbivá, ako je metylénová modrá, metylénová zeleň a chinolín B.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) sa špecializuje na výrobu elektroforéznych prístrojov už viac ako 50 rokov s vlastným profesionálnym technickým tímom a R&D centrom. Máme spoľahlivú a kompletnú výrobnú linku od návrhu po kontrolu a sklad, ako aj marketingovú podporu. Naše hlavné produkty sú elektroforéza (nádrž/komora), elektroforézny zdroj napájania, modrý LED transiluminátor, UV transiluminátor, gélový obrazový a analytický systém atď.
Teraz hľadáme partnerov, OEM elektroforézna nádrž aj distribútori sú vítaní.
Ak máte nejaký plán nákupu pre naše produkty, neváhajte nás kontaktovať. Môžete nám poslať správu na email[chránený e-mailom]alebo[chránený e-mailom], alebo nám zavolajte na číslo +86 15810650221 alebo pridajte Whatsapp +86 15810650221, alebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte QR kód a pridajte ho na Whatsapp alebo WeChat.
Čas odoslania: 20. decembra 2023