1. Klasifikácia
Gélová elektroforéza sa delí na vertikálne typy (vrátane stĺpcových gélov a doskových gélov) a horizontálne typy (hlavne doskové gély) (obrázok 6-18). Vo všeobecnosti je vertikálna separácia o niečo lepšia ako horizontálna, ale horizontálna gélová príprava má aspoň štyri výhody: pod celým gélom je podpora, čo umožňuje použitie agarózy s nízkou koncentráciou; je možné pripraviť platne s agarózovým gélom rôznych špecifikácií; príprava gélu a nakladanie vzorky sú pohodlnejšie; elektroforézna komora je jednoduchá na konštrukciu a nákladovo efektívna. Pretože sa horizontálna elektroforéza uskutočňuje s platňou s agarózovým gélom úplne ponorenou asi 1 mm pod povrchom elektroforézneho pufra, nazýva sa tiež ponorená elektroforéza.
Elektroforéza Tank DYCP-31DN pre elektroforézu na agarózovom géli
2. Systém vyrovnávacej pamäte
Pri separácii nukleových kyselín väčšina systémov používa kontinuálne systémy. Bežne používané elektroforézne pufre zahŕňajú TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l kyselina boritá, 0,0024 mol/l EDTA) pufor a THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l octan sodný, 0,0018 mol/l EDTA) pufor. Tieto pufre sa vo všeobecnosti pripravujú ako 10x zásobné roztoky a pri použití sa zriedia na požadovanú koncentráciu. Rýchlosti migrácie lineárnej a kruhovej DNA v agarózovom géli sa líšia v závislosti od použitého pufra. V pufri THE je rýchlosť migrácie lineárnej DNA väčšia ako rýchlosť kruhovej DNA, zatiaľ čo v pufri TBE je opak pravdou.
3. Príprava agarózového gélu
(1) Príprava horizontálneho agarózového gélu
(a) Pripravte požadovanú koncentráciu agarózového gélu pomocou 1x elektroforézneho pufra.
(b) Zahrejte agarózu do úplného rozpustenia buď vo vriacom vodnom kúpeli, na magnetickom miešadle alebo v mikrovlnnej rúre. Roztok agarózy ochlaďte na 55 °C a pridajte farbivo etídium bromid (EB) na konečnú koncentráciu 0,5 μg/ml.
(c) Utesnite okraje sklenených alebo akrylových platní malým množstvom agarózového gélu, pridajte hrebeň a zuby hrebeňa umiestnite asi 0,5 až 1,0 mm nad platňu.
(d) Roztopený roztok agarózového gélu kontinuálne nalievajte do sklenenej alebo akrylovej formy na platňu (hrúbka závisí od objemu vzorky DNA), aby sa zabránilo vniknutiu vzduchových bublín. Necháme prirodzene stuhnúť pri izbovej teplote.
(e) Po úplnom stuhnutí hrebeň opatrne odstráňte. Pridajte primerané množstvo elektroforetického tlmivého roztoku do gélovej nádrže, pričom dbajte na to, aby bola gélová platňa ponorená asi 1 mm pod povrch tlmivého roztoku na elektroforézu.
(2) Príprava vertikálneho agarózového gélu
a) Odstráňte mastnotu alebo zvyšky zo sklenených platní umytím etanolom.
(b) Umiestnite rozperné dosky medzi prednú a zadnú priehradku, zarovnajte okraje rozperných dosiek s prednou a zadnou priehradkou a zaistite ich svorkami.
(c) Pridajte 2 % agarózy v 1x pufri medzi okraje dištančných doštičiek, aby ste vytvorili 1 cm vysokú agarózovú zátku na dne komory na odlievanie gélu.
(d) Nalejte rozpustený agarózový gél v požadovanej koncentrácii, pripravený v 1x pufri, do gélovej komory až 1 cm pod vrch.
(e) Vložte hrebeň tak, aby sa pod zubami hrebeňa nezachytili vzduchové bubliny. Niekedy sa môžu objaviť vrásky na hrebeňových zuboch počas chladenia agarózového gélu; v takýchto prípadoch jednoducho pridajte trochu rozpustenej agarózy na vrch, aby stuhla.
(f) Odstráňte hrebeň. Aby ste zabránili úniku tlmivého roztoku v plniacej štrbine, utesnite spojenie medzi platňou s agarózovým gélom a elektroforetickou komorou 2 % agarózou a pridajte požadované množstvo tlmivého roztoku.
(g) Pridajte 1 x elektroforézny pufor do gélovej komory.
(h) Opatrne naneste vzorky DNA na agarózový gél pod tlmivým roztokom.
Viac informácií o základných poznatkoch o elektroforéze na agarózovom géli budeme zdieľať budúci týždeň. Prajeme si, aby tieto informácie boli užitočné pre váš experiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) sa špecializuje na výrobu elektroforéznych prístrojov už viac ako 50 rokov s vlastným profesionálnym technickým tímom a R&D centrom. Máme spoľahlivú a kompletnú výrobnú linku od návrhu po kontrolu a sklad, ako aj marketingovú podporu. Naše hlavné produkty sú elektroforéza (nádrž/komora), elektroforézny zdroj napájania, modrý LED transiluminátor, UV transiluminátor, gélový obrazový a analytický systém atď.
Teraz hľadáme partnerov, OEM elektroforézna nádrž aj distribútori sú vítaní.
Ak máte nejaký plán nákupu pre naše produkty, neváhajte nás kontaktovať. Môžete nám poslať správu na email[chránený e-mailom]alebo[chránený e-mailom], alebo nám zavolajte na číslo +86 15810650221 alebo pridajte Whatsapp +86 15810650221, alebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte QR kód a pridajte ho na Whatsapp alebo WeChat.
Čas odoslania: 07. december 2023